Аллергические пробы, их сущность, применение в диагностике инфекционных болезней
Аллергические пробы — биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.
При многих инфекционных заболеваниях за счет активации клеточного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагностики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, микозов и гельминтозов. Аллергические пробы обладают специфичностью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых.
Все аллергические пробы подразделяют на две группы — пробы in vivo и in vitro.
К первой группе
Аллергические пробы in vitroоснованы на выявлении сенсибилизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.
Для проведения аллергических проб используют аллергены — диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные аллергены, используемые в диагностике инфекционных заболеваний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных культур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.
Кожные пробы.Инфекционные аллергены вводят, как правило, внутрикожно или накожно, путем втирания в скарифицированные участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю треть передней поверхности предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллергена. Через 28 — 48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы.
Неинфекционные аллергены (пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно путем скарификации и втирания или внутрикожной инъекцией разведенного раствора аллергена. В качестве отрицательного контроля используют ИХН, в качестве положительного — раствор гистамина. Результаты учитывают в течение 20 мин (ГНТ) по величине папулы (иногда до 20 мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или сомнительного результата прик-теста. По сравнению с последним, дозу аллергена уменьшают в 100-5000 раз.
Кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выявления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.
Пробы in vitro. Эти методы исследования безопасны для больного, достаточно чувствительны, позволяют количественно оценить уровень аллергизации организма.
В настоящее время разработаны тесты для определения сенсибилизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, тканевых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворотке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, специфическое розеткообразование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, а также аллергосорбентные методы (определение специфических IgE в сыворотке крови).
Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ).РТМЛ основана на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизированными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ).В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов периферической крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических факторов — аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза — митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества).
Реакция специфического розеткообразования.Розетки — характерные образования, возникающие in vitro в результате прилипания эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спонтанное розеткообразование здоровых людей составляет 52 — 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствующие аллергены.
Реакция дегрануляции тканевых базофилов.Методика основана на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизированных цитофильными AT из сыворотки крови больного.
Базофильный тест Шелли.Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присутствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент.
Определение антител класса IgE in vitro. Лабораторная диагностика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgEанти-IgE. При использовании радиоактивной метки метод носит название радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в качестве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ). Время анализа — 6 — 7 часов. Принцип метода: фиксированный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сывороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфические IgEанти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специфическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.
Источник
Аллергический метод диагностики инфекционных заболеваний
При ряде инфекционных заболеваний организм приобретает повышенную чувствительность к аллергенам бактерий их вызывающих. Этот феномен помогает установлению этиологического диагноза. В ряде случаев специфическая бактериальная аллергия формируется рано, в первые дни болезни, что используют в целях ранней диагностики туляремии (внутрикожная аллергическая проба с тулярином становится положительной на 2-й — 3-й день).
В других случаях аллергическая перестройка организма происходит позднее и выявление специфической аллергии может быть использовано в интересах ретроспективного диагноза. Методы гипосенсибилизации организма с помощью соответствующих аллергенов используют для лечения больных некоторыми хроническими формами болезней. Лечебное применение бактериальных аллергенов оправдано в случаях, когда антибактериальная терапия и другие методы лечения не достигают успеха и болезнь приобретает хроническое рецидивирующее течение.
К таким нозологиям в настоящее время можно отнести ряд инфекционных болезней, дающих хронические формы нелегочный туберкулез (поражение сетчатки глаза), бруцеллез (рецидивирующий миокардит), токсоплазмоз (поражения опорно-двигательного аппарата).
Аллергические пробы (накожные и внутрикожные) получили всеобщее признание в диагностике таких бактериальных инфекций, как туляремия, бруцеллез (проба Бюрне), туберкулез (накожная проба Пиркета и внутрикожная проба Манту) токсоплазмоз, грибковые поражения кожи, сап и риккетсиозы (лихорадка Ку). Наиболее проста для выполнения накожная аллергическая проба в сравнении с внутрикожной и другими способами введения аллергена.
Методика внутрикожной аллергической пробы состоит в следующем: на сгибательную поверхность предплечья или на кожу плеча (после обработки 70% спиртом) наносится капля аллергена и через нее производят легкую скарификацию (без появления крови!). Положительная проба (через 24 и 48 ч) при наличии сенсибилизации организма к вводимому аллергену проявляется воспалительной реакцией различной интенсивности: краснота, отек, образование пузырьков, иногда с ощущением местного зуда и жжения.
Степень выраженности реакции и ее продолжительность зависят от состояния сенсибилизации организма и концентрации бактериального аллергена (например при диагностике туберкулеза она не должна быть выше 1:10 000 (!) во избежание очаговых реакций в легких, протекающих с деструкцией (!) легочной ткани).
Диагностика вирусных инфекций
В основе лабораторной диагностики вирусных инфекций лежит обнаружение вируса и антител к нему. Материалом для исследования служат биологические жидкости организма и ткани, где вирус содержится в наибольших количествах. В зависимости от характера и стадии болезни исследуют кровь, спинномозговую жидкость, отделяемое конъюнктивы, уретры, шейки матки, носоглоточную слизь, фекалии, мочу и кусочки тканей органов, полученные с помощью прижизненной биопсии или у трупа.
Для вирусологических исследований материал от больного вводят различным лабораторным животным, в куриные эмбрионы и тканевые культуры; выбор материала и метод исследования определяется тропизмом вируса, присущим различным вирусным инфекциям и его способностью к размножению in vivo и in vitro. Идентификация вируса проводится с помощью специфических методов с применением серологических реакций.
В последние годы для диагностики применяют полимеразно-цепную реакцию (ПЦР), спектр индикации различных вирусов этим методом быстро расширяется. В настоящее время разработана вирусологическая диагностика гепатитов А, В, С, Д, G, TTV; определение вирусов герпеса, цитомегаловирусов, ВИЧ и др. Определяют не только их присутствие в исследуемом материале (кровь и др.), но и количество вирусных частиц (так называемую «вирусную нагрузку» -степень вирусемии и репликацию вируса), что важно не только для диагностики, но и для динамического наблюдения за течением болезни и для оценки эффективности проводимого противовирусного лечения (количество вируса снижается вплоть до его исчезновения).
Наряду с ПЦР сохраняют свое значение некоторые рутинные лабораторные методы диагностики вирусных инфекций: прямая микроскопия мазков-отпечатков из носа для определения ДНК- и РНК-содержащих вирусов; реакция иммунофлюоресценции (РИФ), непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) в диагностике гриппа и других ОРВИ; выделение чистых культур вирусов гриппа для определения их типа.
Широко применяют РСК для определения титра антител у больных в динамике болезни; реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), позволяющую определить степень специфического иммунологического ответа организма; применяют также реакции нейтрализации, преципитации в агаре и многие другие специальные вирусологические методы.
Источник