Меню

Бактериоскопический метод диагностики инфекционных заболеваний

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Микроскопический. С помощью микроскопии нативного патологического материала определяют вид возбудителя заболевания по форме, взаиморасположению и способности окрашиваться определенными кра­сителями.

Бактериологический. Этот метод основан на выделении чистой культуры возбудителя заболевания и его идентификации (определение вида микроба).

Серологический. Метод основан на определении специфических антител в крови больных или переболевших инфекционными заболева­ниями к соответствующим возбудителям с помощью различных реакций (агглютинации, пассивной гемагглютинации, связывания комплемента, преципитации и других).

Биологический. В основе этого метода лежит заражение лабораторных животных исследуемым материалом от больного с целью воспроизведения у них инфекционного заболевания или последующего выделения возбудителя.

Аллергический. С помощью этого метода обнаруживают повышен­ную чувствительность макроорганизма к определенным возбудителям инфекционных заболеваний или продуктам их жизнедеятельности. Для аллергических проб используют препараты, которые называются аллергенами.

Молекулярно-генетический. С помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяют в исследуемом материале наличие возбудителя инфекционного заболевания по специфичным для него последовательностям нуклеотидов.

ПРИЗНАКИ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ (для определения вида микроба)

Морфологические — форма, величина и характер расположения микробов друг к другу.

Тинкториалные — способность микробов окрашиваться различ­ными красителями.

Культуральные — особенности роста микробов на жидких и плотных питательных средах.

Биохимические — способность микроорганизмов потреблять различные вещества (углеводы, белки и другие) с образованием характерных конечных продуктов, или наличие у микроорганизмов различных ферментов (уреаза, цистиназа и другие).

Антигенные — особенности химического состава микробных клеток (антигенной структуры), выявляемые с помощью специфических диагностических иммунных сывороток,

Чувствительность к специфическим фагам — способность бактерий лизироваться эталонными специфическими фагами.

Биологические свойства. Токсигенность — способность продуци­ровать экзотоксин. Чувствительность к определенным колицинам или тип синтезируемых колицинов.

Определение понятий «микроорганизмы» и «вид»

Микроорганизмы — это невидимые простым глазом живые существа, включающие в себя представителей всех царств жизни — плазмиды, вирусы, прокариоты (эубактерии и архебактерии) и эукариоты. Они стоят на низших ступенях эволюции и играют важную роль как в общей экономике природы, так и в патологии человека, животных и растений.

Вид — совокупность микроорганизмов, имевших общий корень происхождения, сходный генотип (более 80% гомологии ДНК) и макси­мально близкие фенотипические признаки и свойства.

Метод люминесцентной микроскопии.

Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых лучей света. При этом длина волны излучаемого при люминесценции света всегда будет больше, чем длина волны света, возбуждающего люминесценцию. Так, если освещать объект синим светом, то он будет испускать лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цветов.

Читайте также:  Медицинская диагностика в новосибирске

Препараты для люминесцентной микроскопии окрашивают специаль­ными (светящимися) люминесцентными красителями — флуорохромами (например, раствор акридинового оранжевого 1:5000 — 1:10000). Лучи света от сильного источника (обычно ртутной лампы сверхвысокого давления) пропускаются через сине-фиолетовый фильтр. Под действием этого коротковолнового излучения окрашенные акридиновым оранжевым бактерии начинают светиться красным или зеленым светом. Для того, чтобы синий свет, вызывающий люминесценцию, не мешал наблюдению, над окуляром микроскопа ставят «запирающий» желтый светофильтр, задерживающий синие, но пропускающие желтые, зеленые и красные лучи.

В результате при наблюдении в микроскопе на темном фоне будут видны микробные клетки, светящиеся желтым, зеленым или красным цветом. При окраске акридиновым оранжевым дезоксирибонуклеиновая кислота (ядерное вещество) будет светиться ярко-зеленым цветом, а находящаяся в цитоплазме рибонуклеиновая кислота — красным цветом.

Метод люминесцентной микроскопии позволяет изучать живые нефиксированные бактерии, окрашенные сильно разведенными растворами красителей, не причиняющих вреда микробным клеткам. По характеру свечения могут быть дифференцированы отдельные химические вещества, входящие в состав микробной клетки. Метод с большим эффектом может -быть использован для ускорения диагностики ряда заболеваний.

Флуоресцирующими красителями можно обрабатывать диагностические сыворотки, содержащие антитела к определенным бактериям. Краситель, например, изотиоцианат флуоресцеина, химически соединяется с глобулинами иммунной сыворотки и таким образом как бы избиратель­но метит антитела.

Люминесцирующие сыворотки могут быть использованы для идентификации выделенных культур бактерии и для ускоренной индикации патогенных микробов во внешней среде и в выделениях больных.

Сущность иммунофлуоресцентного метода исследования заключается в том, что из исследуемого материала готовят мазок и после высушивания и фиксации обрабатывают его люминесцирующей сывороткой. При наличии в исследуемом мазке гомологичных бактерий, вследствие адсорбции на них меченных флуоресцирующим краси­телем антител, в люминесцентном микроскопе на темном фоне препарата обнаруживается специфическое яркое желто-зеленое свечение по периферии бактериальных клеток. Центральная часть клеток не светится. Присутствующие в препарате посторонние микробные клетки не светятся.

Источник

Бактериоскопический метод диагностики.

Бактериоскопический метод диагностики.

Бактериоскопический метод — метод диагностики инфекционных заболеваний, основанный на выявлении в исследуемом материале возбудителя и его идентификации по морфологическим и тинкториальным св-вам.

Условия применения метода:

◦ Наличие у возбудителя характерных морфологических и тинкториальных свойств;

◦ Характерная локализация в организме;

◦ Выделение возбудителя во внешнюю среду в больших кол-вах.

Читайте также:  Диагностика памяти у дошкольников с умственной отсталостью методики

◦ Быстрое получение результата;

◦ Низкая стоимость исследования;

◦ Возможно проведение исследования вне лаборатории (диагностика в кабинете врача).

· Морфологических и тинкториальных св-в недостаточно для идентификации подавляющего большинства возбудителей.

· Нет возможности определить чувствительность возбудителя к антимикробным препаратам.

· Нет возможности выявить источник инфекции, пути и факторы передачи возбудителя.

◦ Низкая чувствительность, низкая достоверность отрицательного результата;

· Возбудителя в исследуемом материале должно быть много. Если возбудитель не обнаружен — это не значит, что его нет.

· Результат зависит от уровня подготовки врача-микроскописта.

Заболевания: туберкулез, менингит, гонорея, сифилис, возвратный тиф.

Жгутики. Строение, функции, методы их выявления.

Жгутик состоит из трех основных частей:

◦ Ось с дисками в клеточной стенке и цитоплазматической мембране;

◦ Длинный гибкий жгутик, состоящий из белка-флагеллина.

Вращение жгутика напоминает работу электромотора, в котором вместо электронов перемещаются протоны. Диски, расположенные в мембране играют роль подшипников, статора и ротора.

Протоны, поступающие к ротору за счет градиента протонов, заряжают ротор, вызывая его поворот на некоторый угол, и «проваливаются» внутрь клетки. Постоянная работа протонного двигателя приводит к быстрому вращению жгутика. Описывая конус, жгутик работает наподобие толкающего или тянущего винта.

Функция жгутиков — движение бактериальной клетки. В редких случаях жгутик может служить органом адгезии

Методы выявления: окраска по Морозову, электронная микроскопия.

Иммерсионный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения.

Иммерсионный объектив (от лат. immersio — погружение) — между фронтальной линзой объектива и объектом находится иммерсионная среда:

◦ вода (n=1,33) — водная иммерсия;

◦ глицерин (n=1,43) — глицериновая иммерсия;

◦ иммерсионное масло (n=1,51) — масляная иммерсия.

Для исключения преломления света => уменьшается величина преломляющей способности

Сфера применения: изучение окрашенных микропрепаратов — (бактериологический метод диагностики)

◦ Простота настройки и использования.

Необходимость фиксации и окраски препаратов.

Полезное увеличение x90. Имм. масло ↑апертуру объектива и разрешающую способность. Имеет коэффициент преломления как у предметного стекла 1.5, при этом Z = 0.2 мкм = 200 нм

Капсула, Строение, функции, методы выявления.

Капсула — слизистый слой, состоящий из кислых мукополисахаридов. Содержит большое количество связанной (гидратной) воды. Хорошо пропускает, но не задерживает водорастворимые вещества, в том числе красители.

Функции – адгезия, защита от фагоцитоза, вирулентность.

Иммунологические реакции и Окраска по Бурри-Гинсу:

◦ Негативное контрастирование капсулы (по Бурри) — чёрная тушь (смешивается с исследуемой культурой и высушивается).

Читайте также:  Выездная диагностика авто при покупке

◦ Фиксация в пламени спиртовки.

◦ Окраска тел микробных клеток (по Гинсу) — водный фуксин 1 мин.

Капсула не воспринимает красители, поэтому её выявляют, создавая в препарате черный тушевый фон (метод Бурри). Дополнительная окраска тел а микробной клетки позволяет визуализировать капсулу (метод Бури-Гинса).

Основные группы микроорганизмов. Значение в патологии человека. Примеры.

1.Прокариота — организмы, не обладающие оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами.

1.1. Собственно бактерии – наиболее обширная группа паразитических и свободно живущих прокариота, обладающих жесткой клеточной стенкой (брюшной тиф; сибирская язва; газовая гангрена).

1.2. Актиномицеты – бактерии способные к образованию длинных септированных или несептированных нитей (нитчатые бактерии) (актиномикоз).

Значение в патологии человека — многие актиномицеты используются в качестве штаммов-продуцентов при производстве антибиотиков и ферментных препаратов).

1.3. Микоплазмы – бактерии, не имеющие клеточной стенки (атипичная пневмония; урогенитальный микоплазмоз).

1.4. Риккетсии – бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты (эпидемический сыпной тиф; клещевой риккетсиоз; пятнистая лихорадка скалистых гор; лихорадка цуцугамуши).

1.5. Хламидии – бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты. Отличаются от риккетсий сложным циклом внутриклеточного размножения (трахома; хламидийная пневмония).

1.6. Спирохеты – спирально извитые микроорганизмы. Отличаются наличием внутриклеточных фибриллярных структур (сифилис ;лептоспироз; боррелиоз Лайма).

2. Эукариота – организмы, обладающие оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами.

2.1. Простейшие – одноклеточные эукариотические животные.

2.2. Низшие грибы – гетеротрофные одноклеточные и многоклеточные микроорганизмы.

3. Вирусы – неклеточная форма жизни.

Бактериоскопический метод диагностики.

Бактериоскопический метод — метод диагностики инфекционных заболеваний, основанный на выявлении в исследуемом материале возбудителя и его идентификации по морфологическим и тинкториальным св-вам.

Условия применения метода:

◦ Наличие у возбудителя характерных морфологических и тинкториальных свойств;

◦ Характерная локализация в организме;

◦ Выделение возбудителя во внешнюю среду в больших кол-вах.

◦ Быстрое получение результата;

◦ Низкая стоимость исследования;

◦ Возможно проведение исследования вне лаборатории (диагностика в кабинете врача).

· Морфологических и тинкториальных св-в недостаточно для идентификации подавляющего большинства возбудителей.

· Нет возможности определить чувствительность возбудителя к антимикробным препаратам.

· Нет возможности выявить источник инфекции, пути и факторы передачи возбудителя.

◦ Низкая чувствительность, низкая достоверность отрицательного результата;

· Возбудителя в исследуемом материале должно быть много. Если возбудитель не обнаружен — это не значит, что его нет.

· Результат зависит от уровня подготовки врача-микроскописта.

Заболевания: туберкулез, менингит, гонорея, сифилис, возвратный тиф.

Источник

Adblock
detector